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PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽對策

來源：上海博湖生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2023/01/05 15:25:24 已瀏覽：次

導(dǎo)讀:PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽對策

引物設(shè)計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性，需重新設(shè)計引物。

靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染，這種污染有兩種原因：

一是整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：

①操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣器內(nèi)或濺出離心管外。

②除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭均應(yīng)一次性使用。

③必要時，在加標(biāo)本前，反應(yīng)管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。

二是空氣中的小片段核酸污染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性?？苫ハ嗥唇樱c引物互補后，可擴增出PCR產(chǎn)物，而導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生，可用巢式PCR方法來減輕或消除。

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PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽對策