293細(xì)胞（cellline）是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。是人腎上皮細(xì)胞系，有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來(lái)源都是人胚胎腎細(xì)胞，其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染。

293T細(xì)胞的凍存：

1. 隨著傳代的次數(shù)增加，293T細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)下降，出現(xiàn)突變等。所以要在細(xì)胞購(gòu)進(jìn)時(shí)就進(jìn)行大量?jī)龃?，以保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和持續(xù)性。

2. 在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行凍存，增加細(xì)胞復(fù)蘇成活率。

3. 倒去細(xì)胞上清液，加入D-Hank's液洗去殘留的培養(yǎng)基。

4. 加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。

5. 鏡下觀察細(xì)胞變圓，細(xì)胞間間隙加大時(shí)，加入新鮮培養(yǎng)基吹打混勻。

6. 細(xì)胞計(jì)數(shù)。

7. 將細(xì)胞離心，1000rpm，2min。

8.根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果加入細(xì)胞凍存液（70%完全培養(yǎng)基+ 20% FBS + 10% DMSO）重懸細(xì)胞，密度為3×106個(gè)/ml。

9. 分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管，放入泡沫盒中，放入-80℃低溫冰箱。

10. 第二天將細(xì)胞放入液氮灌，并記錄。

11. 復(fù)蘇檢測(cè)細(xì)胞存活率，細(xì)胞狀態(tài)等，并記錄。