南京艾康全心分析檢測中心是一家集檢測、分析技術(shù)服務(wù)于一體的綜合性第三方檢測機(jī)構(gòu)。艾康全心分析檢測中心目前擁有國內(nèi)*的高分辨率400M的核磁共振波譜儀,全套Agilent系列的液質(zhì)聯(lián)用儀、氣質(zhì)聯(lián)用儀、高效液相儀、氣相色譜儀以及各種理化分析儀器等一系列大型分析儀器。
在一定的色譜操作條件下,色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來衡量。一般說來塔板數(shù)愈多,或塔板高度愈小,色譜柱的分離效能愈好。我們來通過實驗告訴大家柱效是如何進(jìn)行評價的。
如何對柱效進(jìn)行評價?
1、實驗儀器與試劑
儀器:高效液相色譜儀(帶自動進(jìn)樣器,或配置微量進(jìn)樣器)、分析天平。
試劑:苯、萘、聯(lián)苯(均為分析純)、甲醇(色譜純)、純凈水。
2、實驗步驟
色譜條件:色譜柱:C18,4.6×150mm,5μm;流動相:甲醇-水(80:20,v/v);
檢測波長:254nm;流速:1mL·min-1;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。
3、操作步驟
(1)分別精密配制含苯、萘、聯(lián)苯濃度均為約1mg·mL-1的3份對照品溶液各10mL。
(2)分別精密吸取上述對照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中,加流動相稀釋,并定容至刻度,搖勻,得到含苯、萘、聯(lián)苯的混合對照品溶液。
(3)按照上述色譜條件操作,進(jìn)樣,記錄色譜圖。
計算各色譜峰的理論塔板數(shù)及各峰間分離度。
如何提高HPLC柱效?
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。以下介紹了幾種國際上流行的測量和計算柱效值的方法。
1、提高液相色譜柱柱效的方法
(1)降低移動相的流速,但會使分析時間延長。
(2)減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。
(3)減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會減小。
(4)選用低粘度的移動相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析。
(5)適當(dāng)提高柱溫,可降低移動相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低。
(6)盡量減小停滯移動相的體積,但卻加快了移動相的流速。
從以上介紹可看出,在色譜分析過程中,各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對柱效值的跟蹤測算,對自己分析方法不斷的研究和實踐,才能找到*的工作條件。
2、對柱效值進(jìn)行跟蹤測算應(yīng)注意的問題
我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測在所有條件下的柱性能,對大多數(shù)色譜工作者來說,柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力,而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。
不管用什么特定的測試方法,都會有幾個參數(shù)影響柱效的測定。這些參數(shù)包括:洗脫液的成分和粘度及其線流速,測定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長、填料裝填方式、顆粒度,還有所選用的測量和計算方法。而測量和計算方法對柱效值的確定起著極大的作用。
3、幾種測量和計算柱效值的方法
因為色譜峰是假定樣品濃度在移動相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數(shù)。因此計算柱效(以理論塔板數(shù)n為單位)的公式慣上定義為:
式中tR為色譜峰的保留時間;σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差;a是和峰高(從測峰寬的基線量起)有關(guān)的常數(shù),ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側(cè)拐點處做切線與峰底基線相交兩點間的距離。
4、結(jié)論
假如一個色譜峰真是正態(tài)峰型,那么每種計算方法都會得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對稱峰型的溶質(zhì),由于柱內(nèi)的槽或空隙,也會出現(xiàn)非正態(tài)峰型。所以不同的計算方法將會得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對于這些峰型,越在峰的高處測量,計算的理論塔板數(shù)值就越大(準(zhǔn)確性越低)。
在許多情況下,色譜工作者需要能反映整個峰型(包括拖尾)的柱效值,同時為了保證定量的重復(fù)性,也需要色譜峰很好的對稱性。這時對色譜峰非對稱性*敏感的計算方法*適合。如果目的僅僅是要監(jiān)測色譜柱從*次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效,那么以上任何一種方法都可以,應(yīng)選擇*簡便的方法。
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